01. Objectivation de la
synthèse de collagène
02. Objectivation d’un effet anti-collagénasique
03. Objectivation in vitro d’un effet hydratant
04. Objectivation d’un effet anti-élastasique
05. Objectivation d’un effet toxique
06. Objectivation d’une modulation du turn-over des cellules épithéliales
07. Objectivation d’un effet anti-radicalaire
08. Objectivation d’un effet cicatrisant par analyse de la prolifération des fibroblastes
II. Evaluation de l’efficacité des principes actifs et des rayonnements à l’aide de cultures cellulaires
Exclusivité GREDECO
A partir de cultures de fibroblastes ou de kératinocytes en monocouche, il est possible de tester l’efficacité de principes actifs en dilution dans le milieu de culture ou de rayonnements (réalisation d’effet dose).
- Culture de fibroblastes ; incubation des cellules en présence du produit à tester.
- Dosage de la synthèse de collagène (par le kit Sircol Collagen Assay).
Culture de fibroblastes
Culture de fibroblastes en monocouche Immunomarquage anti-HLA DR
- Culture de fibroblastes ; mise en contact des cellules avec l’actif à visée anti-collagénasique par l'intermédiaire du milieu de culture ; lyse cellulaire pour recueillir l'activité enzymatique.
- Détermination de l'activité collagénasique sur gel d'électrophorèse de caséine.
Mise en évidence de l'activité collagénasique
Mise en évidence de l'activité collagénasique des métalloprotéinases de type 2 et 9 par gel d'électrophorèse
A partir de cultures de fibroblastes ou de kératinocytes humains
- Culture de fibroblastes ou de kératinocytes; incubation des cellules en présence du produit à tester à différentes concentrations.
- Analyse de la synthèse in vitro des glycosaminoglycannes par les fibroblastes ou par les kératinocytes (dosage selon Blyscan Glucosaminoglycan Assay
Evaluation d'une activité anti-élastasique en tubes
- Mise en contact de l'actif à visée anti-élastasique avec une élastase (Elastase Pancréatique de Porc, Elastase leucocytaire Humaine synthétique, le N-Succinyl-Tri-Alanine-para Nitroanilide; ou élastase d'origine fibroblastique) en présence d'un substrat
- Lecture spectrophotométrique de l'activité élastasique à 410 nm.
Evaluation d'une activité anti-élastasique sur coupes congelées
- Réalisation de couches histologiques congelées à partir de fragment de peau humaine (chirurgie plastique); élastase et produit à visée anti-élastasique mis au contact des fibres élastiques dermiques.
- Coloration des fibres élastiques par la (+) catéchine (photographies des coupes histologiques)
- Quantification morphométrique des fibres élastiques par analyse d'image informatisée (% de fibres par unité de derme cutané, longueur des fibres, nombre de fibres).
Objectivation d’un effet anti-élastasique
Evaluation d'une activité anti-élastasique en tubes
Evaluation d'une activité anti-élastasique sur coupes congelées
Toxicité sur cultures de fibroblastes ou de kératinocytes
- Culture de fibroblastes ou de kératinocytes
- Coloration cellulaire au Giemsa
- Test de viabilité cellulaire au MTT
Analyse de la prolifération des kératinocytes
- Culture de kératinocytes
- Numération cellulaire après test d’exclusion au bleu trypan.
A partir de cultures de fibroblastes ou de kératinocytes. Possibilité de générer les radicaux libres selon deux systèmes :
- Génération de radicaux libres par le système xanthine/hypoxanthine et évaluation de la viabilité cellulaire par un test MTT
- Génération de radicaux libres par irradiation UV et évaluation de la viabilité cellulaire par un test MT
- - Culture de fibroblastes
- - Numération cellulaire après test d’exclusion au bleu trypan.
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