Dr Sylvie BOISNIC
Dermatologue
Anatomopathologiste
Directeur de Recherche
Dr Lotfi BEN SLAMA
Chirurgien Stomatologue et Maxillo-facial Chargé de Recherche.
Dr Marie-Christine BRANCHET
Docteur en Sciences Biologiques et Biochimiques
La peau humaine maintenue en survie par culture d’organe
Afin de limiter le recours aux tests in vivo avec biopsie, tout en privilégiant l'étude des performances d’un produit chez l'homme, nous avons développé une méthode alternative exclusive de culture, permettant la mise en survie d'un fragment de peau humaine normale ou pathologique jusqu'à21 jours.
Cette méthode innovante standardisée dans le but de retrouver les conditions métaboliques existant in vivo, permet de maintenir la viabilité cellulaire et de conserver la différenciation épithéliale.
Elle permet ainsi d'analyser très rapidement l'efficacité et la tolérance d'un actif, d'un produit complexe, ou d’un rayonnement (Lasers, lumière pulsée, LED, radiofréquences) en s’appuyant sur l'histologie, l'immunohistochimie, la biochimie et la microscopie électronique.
Modèles expérimentaux
Nous avons mis au point des modèles expérimentaux s’appuyant sur cette méthode et permettant de répondre à l’essentiel des objectifs de développement en dermatologie cosmétique
Vieillissement cutané par stress oxydatif, rayonnement ultraviolet (UV) ou agression enzymatique (elastase)
Modèle de peau réactive (inflammation neurogène avec substance P)
Modèle d’altérations du tissu conjonctif par dermocorticoïdes
Simulation de l'effet de la pollution sur le tissu cutané ou d'une intoxication tabagique
Modèle d’inflammation ou d’irritation (lipopolysaccharides)
Simulation d’agression physique de la peau (brûlure)
Simulation d’une hyperpigmentation cutanée par des neuromédiateurs
Exposition à certains rayonnements (lumière visible, I.R…)
DESCRIPTION DE LA MÉTHODE
Un fragment de peau humaine normale, obtenu en chirurgie plastique est déposé dans un insert (nacelle de 12 mm de diamètre ) lui-même positionné sur un puits de culture. en contact direct avec le derme de la peau par l'intermédiaire d'une membrane poreuse (membrane en polycarbonate de porosité 12 µm, Costar).
L'épiderme est en contact avec l'air libre. L'ensemble est maintenu en survie jusqu’à 20 jours à 37°C et en atmosphère air / CO2 (95% / 5%). Du milieu de culture, renouvelé 3 fois par semaine, enrichi en antibiotiques, hormones, extrait pituitaire bovin et SVF, est déposé dans le fond des puits, un passage s'effectuant par diffusion lente entre les deux compartiments vers le derme par l'intermédiaire de la membrane poreuse.
Le produit ou l'actif peut être appliqué à la surface de l'épiderme qui peut également être exposé à un rayonnement. Des actifs peuvent également être mis en dilution dans le milieu de culture afin de simuler les effets d'une administration per os.
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